Validation des résultats du frottis sanguin : lecture de second niveau

La lecture de second niveau d’un frottis sanguin consiste à observer la morphologie des cellules afin de mettre en évidence certaines anomalies pouvant permettre d’établir un diagnostic étiologique. Elle permet, par exemple, de suspecter une anémie hémolytique à médiation immune (AHMI), une microangiopathie, un stress oxydatif, un processus inflammatoire actif suppuratif, un stress corticoïde, une stimulation antigénique ou une leucémie, et également de mettre en évidence la présence d’agents infectieux.

MODIFICATIONS DES HÉMATIES

1. Suspecter une anémie hémolytique à médiation immune

Lors d’AHMI, des agglutinats, des signes de régénération et des sphérocytes peuvent être observés, même si ces modifications ne sont pas toujours présentes (^{photos 1} et ²). Les sphérocytes sont des hématies sphériques qui apparaissent sur le frottis comme plus petites et plus denses en coloration. Ainsi, la présence de trois ou quatre populations d’hématies est notée : des sphérocytes parfois en nombre très élevé (au moins 50 %), des hématies matures (souvent peu nombreuses), des réticulocytes et des érythroblastes. Les sphérocytes ne s’observent facilement que chez le chien car, physiologiquement, l’hématie du chat est petite et sans pâleur centrale. Il est donc presque impossible de différencier les sphérocytes des hématies matures. En conséquence, sur un frottis de chat, seule l’agglutination des hématies permet d’orienter le diagnostic vers une AHMI. Un test d’agglutination et un test de Coombs confirment la suspicion [¹, ³].

2. Suspecter une microangiopathie

En présence d’une anomalie de la paroi des vaisseaux ou de la lumière vasculaire ou lors de fragilité des hématies, ces dernières peuvent subir des traumatismes en raison d’un flux circulatoire turbulent. Les hématies peuvent se fracturer et se déformer. Il est alors possible de noter sur le frottis sanguin la présence de schizocytes, c’est-à-dire d’hématies en forme de croissant (au moins une tous les cinq champs au grossissement × 1 000), de kératocytes, correspondant à des hématies avec des cornes (au moins une tous les cinq champs au grossissement × 1 000), et éventuellement d’acanthocytes, c’est-à-dire d’hématies possédant à leur périphérie des prolongations en nombre variable en forme de doigt de gant (au moins une par champ à × 1 000) (^{photos 3a}, ^3b et ^3c) [¹, ³].

3. Suspecter un stress oxydatif

Lors de stress oxydatif secondaire à une intoxication (paracétamol, oignon, ail, poireau, par exemple) ou à une maladie systémique, notamment chez le chat (pancréatite, diabète sucré compliqué, lymphome), l’observateur peut noter la présence de modifications morphologiques des hématies : corps de Heinz, eccentrocytes, pycnocytes (^{photo 4}). Les corps de Heinz sont faciles à identifier lorsqu’ils sont observés en périphérie des hématies et forment une petite “boule” avec un liseré cytoplasmique plus clair. Ils le sont plus difficilement dans les autres cas et apparaissent alors comme des plages rondes plus claires dans l’hématie. Les eccentrocytes sont caractérisés par une partie de l’hématie qui est décolorée, dépourvue d’hémoglobine. Les pycnocytes sont des eccentrocytes pour lesquels le morceau de membrane s’est effondré.

L’hémoglobine de chat est plus sensible à l’oxydation, les hématies présentent donc fréquemment des corps de Heinz à leur périphérie sans qu’une hémolyse ni une intoxication ne soient présentes.

Pour suspecter une anémie hémolytique secondaire à un stress oxydatif par intoxication, la coexistence d’une anémie régénérative et d’un grand nombre d’hématies altérées par stress oxydatif (corps de Heinz, eccentrocytes), c’est-à-dire plusieurs par champ au grossissement × 1 000, est essentielle [¹, ³].

MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES

1. Suspecter un processus inflammatoire actif suppuratif ou nécrotique

Lors de processus inflammatoire actif, la présence de band cells, c’est-à-dire de neutrophiles jeunes non segmentés, peut être notée. En cas de processus inflammatoire suppuratif, les neutrophiles peuvent apparaître comme toxiques. Il est possible d’observer différents signes de toxicité, par exemple des corps de Döhle (inclusions bleu grisâtre intracytoplasmiques), un cytoplasme basophile ou sale, des filaments chromatiniens, des vacuoles optiquement vides, un gigantisme ou encore des noyaux annulaires (^{photos 5a}, ^5b et ^5c). Pour être pris en compte, ces signes de toxicité doivent atteindre un grand nombre de neutrophiles (au moins 30 %) [², ⁴].

2. Suspecter un stress corticoïde

Lors de stress corticoïde (endogène ou exogène), une leucocytose peut être mise en évidence. Cette leucocytose est caractérisée par une neutrophilie, une lymphopénie, et, éventuellement, une monocytose et une éosinopénie. Elle est généralement comprise entre 15 000 et 25 000 leucocytes/µl, mais atteint parfois 40 000 leucocytes/µl. Les neutrophiles peuvent apparaître hypersegmentés, voire pycnotiques (^{photos 6a}, ^6b et ^6c) [², ⁴].

3. Suspecter une stimulation antigénique

Lors de stimulation antigénique, le frottis sanguin met parfois en évidence des lymphocytes réactionnels. Ces derniers peuvent être hyperbasophiles, à grains, blastiques ou encore en flower cells (lymphocyte avec un noyau en forme de fleur) (^{photos 7a}, ^7b et ^7c). La population lymphocytaire est, dans ce cas, polymorphe. La présence de lymphocytes réactionnels est le signe d’une stimulation antigénique, comme lors de maladie vectorielle (babésiose, ehrlichiose, leishmaniose, etc.) ou dysimmunitaire, ou à la suite d’une vaccination, et s’accompagne parfois d’une lymphocytose [², ⁴].

4. Suspecter une leucémie

Lors de leucémie, la population néoplasique apparaît généralement monomorphe et peut être en quantité normale ou augmentée. Lors de leucémie aiguë, la population néoplasique est blastique (avec une chromatine réticulée dévoilant des nucléoles plus ou moins proéminents) (^{photos 8a} et ^8b) [², ⁴].

IDENTIFIER LES AGENTS INFECTIEUX

1. Agents infectieux des hématies

Plusieurs hémoparasites sont susceptibles d’infecter les hématies.

Piroplasmes

Les piroplasmes sont des parasites intra-érythrocytaires possédant un cytoplasme non coloré à légèrement bleuté et un noyau périphérique rouge à violet (^{photo 9}). Ils peuvent varier considérablement en taille, avec des formes larges (2,5 à 5 µm) facilement visualisables comme Babesia canis et des formes petites (1 à 2,5 µm) difficiles à voir comme Babesia gibsoni et Babesia felis. Les formes larges apparaissent classiquement sous un aspect de poire et doubles, alors que les petites sont généralement rondes. Les piroplasmes ne doivent pas être confondus avec certains artefacts de séchage dans les hématies [¹, ³].

Mycoplasmes

Les mycoplasmes sont des hémoparasites retrouvés à la surface des hématies. Il en existe plusieurs espèces. M. haemofelis est une bactérie de petite taille (0,5 à 1 µm), ronde, bacillaire ou en forme d’anneaux, isolée ou s’organisant en chaînettes, à la surface des hématies, visible sur le frottis sanguin (^{photo 10}). Candidatus M. haemominutum est une bactérie de plus petite taille, de forme ronde d’environ 0,3 µm de diamètre, généralement non visible sur le frottis sanguin. Ces parasites se détachant rapidement de la surface des hématies quand le sang est prélevé sur tube EDTA, il convient de réaliser un frottis immédiatement après le prélèvement. Les mycoplasmes ne doivent pas être confondus avec les corps de Howell-Jolly ou encore des dépôts de colorants. Le diagnostic de mycoplasmose est donc délicat à établir sur un frottis sanguin, d’autant que la parasitémie est de courte durée [¹, ³].

2. Agents infectieux des leucocytes

Hépatozoon

Hepatozoon canis est un protozoaire généralement responsable d’une maladie discrète ou est une découverte fortuite en France. Les gamétocytes peuvent être observés dans les neutrophiles ou les monocytes. Ils apparaissent en forme de gélule (5 à 10 µm) avec un noyau faiblement coloré (^{photo 11}). Ils peuvent être associés exceptionnellement à une leucocytose neutrophilique extrême ou à une réaction leucémoïde et à des signes cliniques intenses. La parasitémie est variable, de faible à très importante [², ⁴].

Rickettsies

Anaplasma phagocytophilum infecte les granulocytes et Ehrlichia canis, les monocytes. Les morulas d’Anaplasma phagocytophilum et d’Ehrlichia canis apparaissent sous forme d’une grappe basophile de taille variable et peuvent être retrouvées dans les neutrophiles et les monocytes, respectivement (^{photo 12}). La sensibilité du frottis sanguin pour la détection d’Ehrlichia canis est faible, tandis qu’elle est plus élevée pour celle d’Anaplasma phagocytophilum [², ⁴].

3. Autres agents infectieux : microfilaires

Les microfilaires sont des parasites extracellulaires de grande taille (200 µm) visibles à faible grossissement. Elles présentent deux extrémités avec une tête arrondie et une queue filiforme, et contiennent de nombreux noyaux basophiles (^{photo 13}). Elles ne doivent pas être confondues avec des fibres textiles et peuvent être présentes en très petit nombre.

Conclusion

La lecture de second niveau du frottis sanguin permet d’observer la morphologie des cellules et d’obtenir parfois un diagnostic en fonction des anomalies observées.

Références

• 1. Harvey JW. Evaluation of erythrocytes. In: Veterinary hematology. A diagnostic guide and color atlas. Elsevier, Saint Louis, Missouri. 2012:49-121.
• 2. Harvey JW. Evaluation of leukocytic disorders. In: Veterinary hematology. A diagnostic guide and color atlas. Elsevier, Saint Louis, Missouri. 2012:122-176.
• 3. Messick JB. Erythrocytes. In: Schalm’s veterinary hematology. 6^th ed. Blackwell, Ames, Iowa. 2010:23-260.
• 4. Teske E. Leukocytes. In: Schalm’s veterinary hematology. 6^th ed. Blackwell, Ames, Iowa. 2010:261-417.