Lymphadénite caséeuse : diagnostic de laboratoire - La Semaine Vétérinaire n° 1542 du 31/05/2013
La Semaine Vétérinaire n° 1542 du 31/05/2013

Formation

PRODUCTIONS ANIMALES/PETITS RUMINANTS

Auteur(s) : CLÉMENCE GUINARD*, KARIM ADJOU**

La lutte contre les infections par C. pseudotuberculosis dépend de la disponibilité de tests de diagnostic. De nombreux tests ont été proposés dans le monde, pour le diagnostic individuel et de troupeau, mais aucun n’est idéal, ce qui rend le dépistage difficile.

En grande majorité, ces tests sont dirigés contre des anticorps anti-phospholipase D, cette protéine étant le facteur de virulence principal. Dans les pays où ils ont été développés, l’objectif est de détecter les animaux porteurs avant l’apparition des signes cliniques, pour pouvoir les éliminer du troupeau. Certains ne sont pas disponibles en France.

IDENTIFICATION DE LA BACTÉRIE

Le diagnostic de certitude peut être établi après la mise en culture d’un échantillon, par une diagnose des colonies bactériennes selon leurs caractéristiques morphologiques et leurs propriétés biochimiques. Cependant, cette méthode demande du temps et est relativement coûteuse.

TEST ELISA

Il existe plusieurs tests Elisa (enzyme-linked immunosorbent assay) utilisés pour dépister les infections à Corynebacterium pseudotuberculosis. Tous n’ont pas la même sensibilité ni la même spécificité. Cette différence de fiabilité peut obliger à tester de nouveau les animaux dont le résultat est douteux, avec une autre méthode choisie pour compenser les faiblesses du premier test (Baird et Malone, 2010).

MICROAGGLUTINATION

Une méthode de dépistage de la maladie caséeuse chez des moutons et des chèvres utilisant la méthode de la micro­agglutination directe a été envisagée. La sensibilité obtenue est de 52,3 % pour les caprins et de 89,7 % chez les ovins (voir tableau). La spécificité est, respectivement, de 64,9 % et 21,7 %. La méthode testée était a priori intéressante, car simple d’utilisation et peu coûteuse. Cependant, elle s’est révélée trop peu fiable pour être utilisée sur le terrain en tant qu’outil diagnostique dans le cadre d’un programme d’éradication. Sa spécificité, en particulier sa valeur prédictive positive, est beaucoup trop faible. Mais il est fréquent d’obtenir des réactions croisées avec les tests sérodiagnostiques fondés sur des méthodes d’agglutination (Menzies et Muckle, 1989).

WESTERN BLOT

Cette technique biochimique détecte des anticorps de la phospholipase D (PLD), une exotoxine émise par la bactérie, et l’un des facteurs de virulence majeurs. Le test est considéré positif quand au moins deux bandes sont bien visibles, à 31 kDa et 68 kDa. Avec une ou deux bandes faiblement distinguables, il est qualifié de non concluant.

TEST SHI

Ce test d’inhibition de l’hémolyse (synergistic hemolysis-inhibition) mesure les anticorps anti-PLD. Il est commercialisé aux États-Unis.

Il affiche une bonne fiabilité, avec une sensibilité de 90,9 %, et une spécificité de 61 % chez les ovins (Menzies et Muckle, 1989). Sa sensibilité est de 98 % chez les caprins, mais il a une mauvaise spécificité : 28 % des chèvres qui ne présentent aucun abcès sont malgré tout positives au test (Smith et Sherman, 2009). Il détecte l’infection à des stades précoces, et quand les lésions sont internes. Ce test ne permet pas de faire la distinction entre les animaux infectés et vaccinés.

LA PCR

Les deux avantages principaux de cette technique de biologie moléculaire sont sa bonne spécificité et sa rapidité. Plus récemment, un protocole de polymerase chain reaction multiplex (mPCR) a été développé. Il cible trois gènes de la bactérie, ceux de l’ARNr 16S, rpoB et pld. Ce test s’est révélé efficace pour détecter la bactérie à partir de 103 UFC. Il pourrait donc être utilisé comme méthode de confirmation de la maladie caséeuse, à la place de la culture bactérienne.

DÉTECTION DE L’INTERFÉRON-GAMMA

Une alternative à la sérologie dans le diagnostic de laboratoire de la maladie caséeuse est la détection de molécules intervenant dans la réponse immunitaire à médiation cellulaire. Il est notamment possible, à partir du sang total, de rechercher la réponse interféron-γ (IFN-γ) aux antigènes de C. pseudotuberculosis. L’interféron γ, chez les petits ruminants et les bovins, est très similaire. En 2007, des chercheurs ont utilisé un test détectant l’IFN-γ commercialisé pour les bovins (Bovigam®, Pfizer) pour savoir s’il pourrait être utilisé dans un but d’éradication de la maladie caséeuse des troupeaux ovins, en éliminant les animaux porteurs. Ils ont réussi, en utilisant comme antigène la bactérie entière, inactivée dans le formol, à obtenir un test dont la sensibilité est de 91 % et la spécificité de 98 %. Ce test est utilisable quand les ovins ont été vaccinés. Il est utile pour dépister la maladie caséeuse, tant à l’échelle du troupeau qu’à celle de l’individu. Il permet de détecter la plupart des ovins présentant des signes précoces de la maladie, c’est-à-dire des nœuds lymphatiques hypertrophiés et des abcès.

SPECTROSCOPIE PAR RÉSONANCE PLASMONIQUE DE SURFACE (SPR)

L’efficacité d’un système de détecteur optique par résonance plasmonique de surface (Biacore®) a été testée pour détecter les anticorps anti-PLD dans du sérum ovin. Cette méthode a l’avantage d’être rapide, reproductible et automatisée, ce qui permet d’analyser de nombreux échantillons. Les interactions non spécifiques entre les anticorps du sérum et la puce du capteur sont en revanche un risque non négligeable, étant donné la nature complexe du sérum. Elles peuvent être diminuées grâce à l’ajout de certaines solutions au sérum. De plus, la puce de détection doit pouvoir être réutilisée sans que l’essai perde sa sensibilité afin d’obtenir une reproductibilité validée. Pour cela, le sérum doit être dilué, et de nombreuses solutions de régénération de la surface de la puce ont été testées.

La sensibilité et la spécificité du test ont été obtenues par comparaison des résultats avec ceux obtenus avec un test Elisa double-sandwich et un Elisa indirect dirigé contre la PLD, de caractéristiques connues. La sensibilité calculée est de 86 %, la spécificité de 76 %. Finalement, cette méthode, fondée sur la détection de la réponse humorale dirigée contre la PLD, serait une bonne alternative à l’utilisation de tests Elisa (Stapelton et coll., 2009).

COMPTAGE MONOCYTAIRE ET CONCENTRATION EN HAPTOGLOBINE SÉRIQUE

Des scientifiques se sont intéressés aux protéines de la phase aiguë (fibrinogène et haptoglobine), qu’ils ont mesurées, et à des comptages leucocytaires, afin de déterminer s’ils peuvent être utiles dans le diagnostic de la lymphadénite caséeuse. Ils en ont observé l’évolution en lien avec la progression de la maladie (Bastos et coll., 2011).

Ces éléments se sont révélés comme des marqueurs non fiables d’une infection par C.pseudotuberculosis. Ils n’ont pas permis de distinguer les animaux séropositifs des séronégatifs. Malgré tout, les monocytes étaient présents en proportion significativement plus importante pendant la phase aiguë de l’infection. L’augmentation de la concentration en haptoglobine pendant cette phase est apparue comme un bon marqueur de l’absence de progression clinique de la maladie caséeuse. Ces deux marqueurs pourraient donc être utiles pour l’évaluation de l’évolution clinique de la maladie chez les ovins.

Références

  • → Baird GJ, Malone FE (2010). Control of caseous lymphadenitis in six sheep flocks using clinical examination and regular Elisa testing. Vet. Rec., 166, 358–362.
  • → Bastos BL, Meyer R, Guimarães JE, Ayres MC, Guedes MT, Moura-Costa LF et coll. (2011). Haptoglobin and fibrinogen concentrations and leukocyte counts in the clinical investigation of caseous lymphadenitis in sheep. Vet. Clin. Pathol., 40, 496-503.
  • → Menzies PI, Muckle CA (1989). The use of a microagglutination assay for the detection of antibodies to Corynebacterium pseudotuberculosis in naturally infected sheep and goat flocks. Can. J. Vet. Res., 53, 313.
  • → Smith MC, Sherman DM (2009). Goat Medicine. 2nd ed. Ames, Iowa, Wiley-Blackwell, 888 p.
  • → Stapelton S, Bradshaw B, O’Kennedy R (2009). Development of a surface plasmon resonance-based assay for the detection of Corynebacterium pseudotuberculosis infection in sheep. Anal. Chim. Acta, 651, 98–104.
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