Implication du motif de capside génogroupe dans la virulence du PCV-2 in vivo

CONTEXTE

Le circovirus porcin de type 2 (PCV-2) est l’agent responsable de la maladie de l’amaigrissement du porcelet (MAP) et des affections associées (syndrome de dermatite-néphropathie et troubles de la reproduction). Les travaux phylogéniques séparent le PCV-2 en 2 génogroupes majeurs : PCV-2a et PCV-2b, qui se différencient par un motif (6 acides aminés) porté par la protéine de capside.

Une étude¹ a recherché si les variations génétiques du PCV-2 sont impliquées dans la virulence en comparant 2 souches représentatives des génogroupes PCV-2a et PCV-2b, et vérifié si le motif spécifique des génogroupes de la capside est un élément déterminant de la virulence.

PROTOCOLE

2 clones d’ADN PCV-2a et PCV-2b sont élaborés en insérant une copie et demie du génome viral dans un vecteur avec une copie unique du gène cap, permettant la libération du génome viral par recombinaison homologue. Par mutagenèse dirigée, les motifs spécifiques de capside des génogroupes sont interchangés dans chacun des clones : le génome du PCV-2a porte le motif PCV-2b (mutant PCV-2a/motif 2b) et le génome du PCV-2b, le motif PCV-2a (mutant PCV-2b/motif 2a).

In vitro, ces 4 “constructions” sont caractérisées afin de vérifier la production de la protéine de capside et de particules virales infectieuses.

Puis, in vivo, 40 porcelets exempts d’organismes pathogènes spécifiés (EOPS) sont répartis en 5 groupes, le 1^er servant de témoin. Dans les 4 autres, les animaux reçoivent respectivement, par voie intramusculaire, 400 µg d’ADN de PCV-2a, de PCV-2b, du mutant PCV-2a/motif 2b ou du mutant PCV-2b/motif 2a.

Les signes cliniques sont suivis jusqu’à 35 jours post-transfection (jpt). La séroconversion et la charge génomique virale sont déterminées dans le sérum par Elisa et polymerase chain reaction (PCR quantitative). Les organes sont prélevés 35 jpt pour y quantifier le nombre de copies du génome et les charges infectieuses.

RÉSULTATS ET CONCLUSION

→ In vitro, les 2 clones parentaux et les 2 mutants sont infectieux (production de la protéine de capside et de particules virales infectieuses pour les 2 clones parentaux et les mutants).

→ In vivo, seule une hypertrophie des ganglions inguinaux et trachéobronchiques est décrite par rapport aux porcelets témoins. Quelques microlésions, évoquant la MAP, sont retrouvées, associées à la présence de protéines virales, sauf dans le groupe inoculé par le mutant PCV-2a/motif 2b.

→ In vivo, la souche PCV-2b est davantage virulente que la PCV-2a, cette dernière induisant une séroconversion plus tardive (à 35 jpt versus 28 jpt, avec une charge génomique moindre). Le mutant PCV-2b/motif 2a présente une virulence intermédiaire entre celles des 2 virus parentaux : la séroconversion est effective à 28 jpt et la détection du génome viral est transitoire pour certains animaux, mais avec une charge virale moyenne inférieure à celle du groupe parental PCV-2b. Le mutant PCV-2a/motif 2b possède des caractéristiques fort différentes de celles des virus parentaux. Aucun anticorps ni aucune copie de génome dans les sérums n’est mis en évidence pendant l’essai pour ce mutant (^{voir figure}). Sa protéine cap différant de celle de son parent, le PCV-2a, par la seule substitution de 4 acides aminés du motif spécifique génogroupe par ceux du PCV-2b. Ces résultats montrent que le motif spécifique du génogroupe est un marqueur moléculaire de cette protéine impliqué dans la différence de virulence entre les souches de PCV-2.

• 1 Allemandou A, Grasland B, Hernandez-Nignol A-C et coll., « Modification of PCV-2 virulence by substitution of the genogroup motif of the capsid protein », Vet. Res. 2011; 42:54.